| SH2D4A互作蛋白的筛选及初步鉴定 |
| 李伟 李婷婷 刘洪 赵彦艳 遗传 2010,32(7).-712-718 |
| SH2D4A 酵母双杂交技术 GST pull—down 蛋白质相互作用 SH2结构域 |
| SH2D4A是SH2蛋白家族成员之一，可能参与酪氨酸蛋白激酶相关受体介导的信号转导，调节细胞的生长、增殖和分化，进而影响人类疾病的发生。文章运用酵母双杂交技术筛选SH2D4A相互作用蛋白，并利用酵母交配（mating）实验和GSTpull—down实验进行了初步鉴定。首先成功构建了酵母诱饵蛋白重组表达载体pGBKT7-SH2D4A；利用该重组体对人肾脏cDNA文库进行逐级筛选，共得到46个阳性克隆；经目的基因的分离、DNA测序及BLAST软件对序列进行比对分析，发现5种可能的SH2D4A互作蛋白fAZGPl、DADl、HSDl7810、KAT5和PKM2）；NetPhos2．0Server软件预测结果显示除HSDl7810外其他4种蛋白均含有磷酸化酪氨酸；进一步以KAT5和HSDl7810作为代表进行了酵母交配和GSTpull—down，证实两者均可直接结合SH2D4A． |
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