| 烟草硫氧还蛋白NtTRXh功能域研究 |
| 刘会敏 孙力军 任海英 董汉松 江苏农业学报 2010,26(2).-254-257 |
| 硫氧还蛋白 活性位点 点突变 二硫键 |
| 利用PCR点突变的方法对烟草硫氧还蛋白基因（NtTRX）进行点突变,得到3个突变克隆和突变蛋白。把N端第13位半胱氨酸（Cysteine,C）残基（13-C）以及第68位、并位于WCGPC中的半胱氨酸残基（68-C）分别用苏氨酸（Threonine,T）加以替换,得到突变蛋白C13T和C68T;用T对13-C和68-C进行双突变,得到突变蛋白C13TC68T。通过原核表达体系表达产生了相应的蛋白质,并分别进行了纯化。利用硫氧还蛋白能催化胰岛素二硫键还原的性质,比较了C13T、C68T、C13TC68T和NtTRXh的活性。结果表明,只有NtTRXh显示活性,3个突变蛋白都失去了还原二硫键的能力。可见,除了WCGPC中的C外,NtTRXh氮末端的C残基也是催化反应所必需的。 |
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