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抗犬Ⅰ型腺病毒单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

李晓叶[1,2] 刘颖[1,2] 蓝田丰[1,2] 艾纯旭[1,2] 陈健[2] 袁宝[2] 刘殿峰[2] 任文陟[2] 中国农学通报 2011,27(11).-31-34

犬I型腺病毒杂交瘤单克隆抗体酶联免疫法鉴定

为制备抗犬I型腺病毒单克隆抗体,将犬I型腺病毒（CAV-I）细胞培养液饱和硫酸铵沉淀,差速离心浓缩,氯化铯密度梯度离心的方法纯化后免疫BALB/c小鼠,三免后效价过1：10000即可取脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇（PEG）作用下融合,通过间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,有限稀释法亚克隆,制备单克隆抗体,并对制备完成的单克隆抗体进行生物学特性鉴定。获得2株能稳定分泌抗CAV-I的单克隆抗体杂交瘤细胞,命名为C8、E9,经鉴定其亚型分别为IgG1和IgG2a。间接ELISA检测效价,2株单抗细胞上清液效价为1：3200～1：6400,腹水效价为1：25600～1：51200。该单克隆抗体与CDV、FPV、FCV病毒均无交叉反应。实验成功制备了抗CAV-I单克隆抗体,为进一步建立相关诊断方法奠定了基础。