| 新型抗HIV-1蛋白GRFT的构建、表达及活性研究 |
| 李昌[1] 李霄[1] 刘玉生[1] 于芳[1] 韩佳丽[2] 胡博[1] 叶明[3] 王婧[1] 杜寿文[1] 金宁一[1] 高等学校化学学报 2011,32(1).-95-99 |
| HIV-1 抗病毒蛋白 GRFT 表达 生物活性 |
| 根据已知的新型抗HIV-1蛋白Griffithsin（GRFT）基因氨基酸序列,推测其DNA编码序列,对密码子优化及修饰后进行全基因化学合成,连接到原核表达载体pET28a（＋）中,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达,获得目的蛋白.SDS-PAGE和Western Blot分析结果表明,目的蛋白得到良好表达并具有抗原活性.对表达条件进行了优化,在最佳表达条件下,目的蛋白的表达量可占菌体总蛋白的55.84%.利用Ni2＋-NTA柱亲和层析法进行目的蛋白的复性和纯化,凝胶成像系统扫描分析表明,其纯度可达94.06%.运用Dot-ELISA法进行复性蛋白的抗原结合活性检测发现,目的蛋白可与HIV-1膜蛋白抗原特异性结合,初步证明所表达的重组蛋白具有良好的体外结合活性.基于制备的能够表达HIV-1 gp120基因的靶细胞模型,运用IFA法开展目的蛋白的细胞结合活性研究,结果发现,目的蛋白能够与靶细胞发生特异性反应,表明成功制备了具有生物活性的新型抗HIV-1蛋白GRFT,为进一步研制新型抗HIV-1基因工程药物及其靶向治疗制剂奠定了基础. |
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