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中华眼镜蛇毒核糖核酸酶的分离纯化及其特殊生物学活性

陶风云[1,2] 赵伟[2] 林强[2] 马润宇[1] 中国生化药物杂志 2010,31(3).-145-149,157

中华眼镜蛇核糖核酸酶分离纯化抑菌作用细胞毒性抗氧化

目的从中华眼镜蛇毒中分离纯化核糖核酸酶，并研究其生物学活性。方法以中华眼镜蛇毒为原料，采用SP—Trisacryl阳离子交换色谱、SephadexG．75凝胶色谱、C8反相色谱等纯化方法，分离纯化具有核糖核酸酶活性的蛋白质，表征其酶学性质，检测其抑茵性、抗肿瘤细胞作用及抗氧化作用。结果SDS—PAGE电泳显示纯化的中华眼镜蛇毒核糖核酸酶（Na—RNase）为相对分子质量为13000的单一成分。该酶最适反应温度为40℃，最适pH值为6．5。米氏常数为3．67μmol／L，最大反应速率为3．52pmol／s。在体外抑茵实验中，在8μmol／L的浓度下对大肠艾希茵和金黄葡萄球菌均未显示出显著抑制作用；在体外细胞毒性实验中，对于Hela肿瘤细胞和正常的人成纤维细胞在8μmol／L的浓度下无明显抑制作用；在抗氧化实验中，浓度达到71．5μmol／mL时，对小鼠肝微粒体脂质过氧化反应的抑制率为41．30％。结论中华眼镜蛇毒中的核糖核酸酶具有抗氧化作用，可能作为氧化还原的调节剂．在有美的疾病治疗方面具有应用的潜能。