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Pseudomonas sp. RT-1低温脂肪酶的纯化及酶学特性

司圣乾陈彦刘燕雅冯蔚宗林琳生物加工过程 2010,8(6).-52-56

Pseudomonas sp. 低温脂肪酶纯化酶学特性

Pseudomonas sp. RT-1是从低温环境下分离的低温脂肪酶产生菌,对该菌产生的胞外脂肪酶（PL-1）进行纯化,并对其酶学特性进行初步研究。Pseudomonas sp. RT-1的发酵上清液经60%（NH4）2SO4沉淀、12~14000截留相对分子质量（MWCO）透析袋透析、Sephadex G75分子筛和超滤浓缩后,得到了电泳纯的P-L1。SDS-PAGE电泳估算其表观相对分子质量为4.43×104。对其酶学特性研究表明：PL-1是低温碱性脂肪酶且对有机溶剂的耐受性较好。10~40℃内有较好的催化活性,最适作用温度为18℃;0~50℃该酶的稳定性较好,当温度超过50℃时则容易失活;最适作用pH为10.2,且pH在9~11时较稳定;该酶对有机溶剂的耐受性较好,10mmol/L的Ca2＋、K＋、Na＋和Fe3＋对PL1的酶活力有促进作用,其中Ca2＋促进作用最大,提高了146.07%,而10mmol/L的Cu2＋、Co2＋、Mn2＋、Mg2＋、Zn2＋、Ba2＋和Al3＋对酶活力具有不同程度的抑制作用,其中Al3＋抑制作用最强,抑制了98.55%;PL-1对C链长度小于或等于12的短链脂肪酸形成的甘油三酯具有较强的水解能力;1mmol/L的去氧胆酸盐（desoxycholate）和0.01%的Triton X100对酶活力具有提高作用,分别提高了30.74%和11.83%;0.01%的SDS和Tween-80、1mmol/L的EDTA和尿素对酶活都有抑制作用,其中EDTA的抑制作用最大,抑制了80%。