| rhKPI／AβPP大规模发酵及纯化工艺 |
| 贺巾超[1] 杨莉莉[1] 马杰[1] 颜波群[2] 韩树海[1] 侯立中[1] 颜炜群[1] |
| 关键词：rhKPI／AβPP 毕赤酵母 发酵 |
| 主要内容：目的：在毕赤酵母（Pichia pastoris）中高效表达AβPP中的Kunitz型蛋白酶抑制剂的结构域（KPI／AβPP），利用80L的发酵罐优化发酵条件，制备rhKPI／AβSPP。方法：克隆kpi基因插入到pPICZα，构建真核表达载体pPICZμ-kpi，经核酸测序确证后，电转化毕赤酵母菌株X-33，筛选高表达rhKPI／AβPP工程菌。结果：筛选出的高表达工程菌采用80L发酵罐甲醇诱导补料批式发酵，在pH3．3、纯氧浓度22％～30％、罐内压力为12psi、甲醇诱导60h时产量1．0g·L^-1。纯化的rhKPI／AβPP经SDS-PAGE分析显示单一区带，相对分子质量6750。质谱测定其相对分子质量为6750，抑制胰蛋白酶的比活性为8．4EPU·mg^-1。结论：克隆、构建、筛选出高效表达rhKPI／AβPP的毕赤酵母工程菌，并建立了稳定的发酵和纯化工艺。 |
| 《吉林大学学报：医学版》 2006,32(2).-278-281 |
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