| 基因重组Echistatin发酵工艺的优化 |
| 杨利军 杨涛 解军 赵志强 牛勃 |
| 关键词：蛇毒锯鳞蝰素 大肠杆菌 发酵 纯化 |
| 主要内容：目的：利用基因工程方法对一种蛇毒锯鳞蝰素蛋白的发酵纯化工艺进行优化，以提高目的蛋白的产量和纯度。方法：对工程茵进行发酵培养并诱导表达，研究不同的培养基、不同补料方式、溶解氧浓度、培养和诱导时间对工程茵产量和目的蛋白表达量的影响，利用几丁质亲和层析纯化Ecs融合蛋白，通过合适温度和pH裂解融合蛋白得到Ecs纯品，并鉴定和检测Ecs活性。结果：经过高密度发酵优化后，茵体湿重可达110g／L，目的蛋白表达量约占总蛋白的40％；亲和层析纯化后，得到Ecs单体，得率为68mg／L发酵液。生物学活性分析显示，重组Ecs能有效抑制血小板的聚集，其活性与天然Ecs相似。结论：通过发酵和纯化工艺优化，大大提高了目的蛋白产量，为进一步规模化研究和生产奠定了基础。 |
| 《中国生物工程杂志》 2005,25(12).-66-69 |
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