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人肽抗生素hPAB-β多拷贝串联基因工程菌的筛选及发酵研究

胡金川汪正清金晓琳黎庶谭银玲李明申晓冬张椿胡福泉饶贤才医学研究生学报.2004,17(3).-193-196

肽抗生素 hPAB-β 串联拷贝发酵

目的：对已构建的人肽抗生素hPAB-β 1～8拷贝串联基因工程菌进行筛选，并对其优势菌株进行发酵研究，为hPAB-β的规模生产奠定基础。方法：对1～8拷贝串联基因工程菌的目标蛋白表达率进行比较后，选择2～5拷贝菌进行菌产量、目标蛋白表达率、包涵体溶解性、亲和层析效果比较，确定最佳多拷贝菌；对其摇瓶条件下发酵的培养液、温度、气体条件、IPTG诱导时机、浓度及时间进行研究。结果：在相同条件下，3拷贝菌产量(3．153g／L)最高，目标蛋白表达率(27．8％)接近最高水平，包涵体能溶解完全；利用亲和层析能成功捕获融合蛋白，后者经羟胺裂解，可获得相对分子质量与合成hPAB-β成熟肽大小相符的小肽，筛选出的优势菌传代稳定，其最佳摇瓶发酵条件为37℃，160r／min条件下，在改良M9-cAA培养液中培养至吸光值(A600)≈2．5时，以终浓度为100μmol／L的IPTG诱导表达5h。结论：确定了3拷贝菌为最佳多拷贝菌，并确定了其最佳摇瓶发酵参数。