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基因工程酵母菌来源的D-氨基酸氧化酶分离纯化

史训龙[1] 冯美卿[1] 贺佳音[2] 袁中一[3] 周珮[1] 复旦学报：医学版.2005,32(1).-71-74,85

S-100 细胞法能透析分离纯化电泳表达硫酸铵沉淀基因工程酵母 D-氨基酸氧化酶

目的以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料，通过破细胞，分离纯化DAAO。方法采用机械研磨，反复冻溶，超声波等多种方法破细胞，获得粗酶液，硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后，经DEAE Sephadex A-50，DEAE-DE52，Q-sepharose等离子交换柱进行第一步分离，获得的含酶粗品，再经Sephacryl S-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO。结果超声波破壁为最佳的破壁方法，得到的每毫升酶液所含的酶活力是其他破壁方法的两倍以上，最高达到12000U／mL。两步硫酸铵沉淀能粗分DAAO，50％硫酸铵沉淀酶回收率可达85％以上。用Q-sepharose、Sephacryl S-100分子筛柱层析两步纯化，酶活力回收率最高可达90％，SDS-PAGE显示单一蛋白条带。结论本实验方法能得到电泳纯的DAAO，总回收率约为40％。