| 密码替换后人促红素基因在大肠杆菌中的高效表达及工程菌的发酵 |
| 葛永红 严君喜 陈智勇 谢觉林 张雪艳 |
| 关键词：EPO 基因 DH5α 大肠杆菌 促红素 改变 表达产物 高效表达 工程菌 表达载体 |
| 主要内容：目的研究人工合成的hEPO基因在大肠杆菌中高效表达及工程菌高密度发酵条件。方法将hEPO基因中大部分大肠杆菌稀有密码子替换成使用频率较高的密码子，人工合成hEPO全基因，然后将其插入表达载体PBV220中，转化大肠杆菌DH5α，挑选构建正确的PBV220-hEPO／DH5α菌落，经升温诱导，SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物；观察改变培养基、培养时间、pH及溶氧量等条件对表达产物的影响。结果经酶切分析，DNA测序鉴定，人工合成的hEPO基因已正确构建到表达载体中。通过高密度发酵培养，最终菌体密度达A600=30(相当于菌体35g／L)，hEPO表达量达30％左右。结论人工合成的hEPO基因在大肠杆菌中得到高效表达，并确定了该工程菌高密度发酵的适宜条件。 |
| 《中国生物制品学杂志》 2005,18(2).-123-125 |
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