| 牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定 |
| 李德华[1,2] 苟业华[2] 胡海洋[2] 徐琦[2,3] 刘忠荣[2] 吴洽庆[2,4] 余晓东[1] |
| 关键词：肠激酶（enterokinase,EK） 甲醇酵母（Pichia pastoris） 高密度发酵 |
| 主要内容：肠激酶（enterokinase，EK）是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶．根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA，测序正确后将其插入甲醇酵母分泌型载体pPICZαA，得到重组质粒pPICZαA／EKL，重组载体经线性化后转化Pichia pastoris SMD1168H，筛选得到重组牛肠激酶轻链工程菌．分别对重组酵母工程菌进行高密度发酵、rEKL（recombinant enterokinase light chain，rEKL）纯化、N端序列测定、生物学活性鉴定等研究工作．结果表明，发酵上清中rEKL含量高，纯化的rEKL专一性强、无其他杂酶活性、N端15个氨基酸序列与文献报道一致．图5参17 |
| 《应用与环境生物学报》 2006,12(6).-819-823 |
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