| 人神经营养因子-3基因的亚克隆及其基因工程细胞模型的建立 |
| 常红[1] 郭梦和[1] 郭坤元[2] 李永贺[1] 第一军医大学学报.2004,24(7).-805-808 |
| 神经营养因子-3／分泌 骨髓间充质干细胞／遗传学 转染 |
| 目的 亚克隆人神经营养因子-3(human neurotrophin-3，NT3)并转染至体外培养的人骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)，建立能够表达和分泌NT3的基因工程细胞模型。方法 采用低糖DMEM培养液+10％胎牛血清体外培养BM-MSCs，流式细胞仪分析其表面标记；构建真核表达载体pcDNA3.1(+)／NT3并通过脂质体介导转染BM-MSCs；收集部分细胞提取其中的总RNA，经逆转录PCR检测NT3基因表达；利用培养上清液体外孵育毛细胞以鉴定其生物学活性。结果 BM-MSCs表达CD13、CD29、CD59．不表达CD11、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、HLA-DR；pcDNA3．1(+)／NT3转染BM-MSCs后，能够表达和分泌NT3，并具有生物学活性，可促进离体的豚鼠耳蜗毛细胞存活。结论 在体外建立表达NT3基因并分泌NT3的基因工程细胞是可行的。 |
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