| 人铜锌超氧化物歧化酶真核表达载体的构建及在酿酒酵母中的分泌表达 |
| 李雪莲[1] 马一君[1] 武峰[2] 史兆兴[3] 王恒梁[3] 黄留玉[4] |
| 关键词：人铜锌超氧化物歧化酶 酿酒酵母 分泌表达 |
| 主要内容：目的：探讨酿酒酵母中人铜锌超氧化物歧化酶（hCu／Zn-SOD）的分泌表达。方法：采用RT-PCR技术从人胃总RNA中分离扩增hCu／Zn-SOD的cDNA，与酿酒酵母交配因子（MF）α信号肽编码序列融合，将融合基因插入大肠杆菌-酵母细胞穿梭型质粒pYES2．0，构建真核分泌表达质粒pYES-MS，将其转化人酿酒酵母的缺陷型菌株INVSc1中，用半乳糖进行诱导表达，采用SDS-PAGE、蛋白质免疫印迹分析及电泳谱活性染色测定表达产物分泌情况及其活性。结果：该工程菌可高效表达一相对分子质量约为21000的蛋白并与兔抗人Cu／Zn—SOD多抗有特异的免疫反应，同时在培养基上清中检测到此表达蛋白的分泌，具有特异性SOD酶活性。结论：作者成功构建了pYES-MS／INV菌株，该菌株大量表达有天然酶活性的hCu／Zn-SOD，并有部分hCu／Zn-SOD分泌到酵母细胞外，为开发hCu／Zn-SOD的基因工程产品奠定了良好的基础。 |
| 《郑州大学学报：医学版》 2007,42(1).-127-130 |
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