| Oenococcus oeni苹果酸-乳酸酶基因克隆及其在酿酒酵母中的表达 |
| 刘延琳[1] 蒋思欣[2] 何秀萍[2] 李华[1] 张博润[2] |
| 关键词：酒酒球菌 苹果酸-乳酸酶基因 转化表达 |
| 主要内容：苹果酸-乳酸酶是苹果酸-乳酸发酵过程中负责苹果酸转化为乳酸的功能酶。在进行酒酒球菌SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因（mleA）克隆测序基础上，以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件，以大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒YEp352为载体，构建了重组表达质粒并转化酿酒酵母YS58。酵母转化子用SD／-Ura平板筛选鉴定。斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中，SDS—PAGE检测表明获得的转化子表达了约60kDa的目标蛋白。获得的转化子在添加了L-苹果酸的培养基中培养4d；取培养液上清用HPLC检测L-苹果酸及L-乳酸含量，采用t检验进行差异显著性分析，结果表明mleA基因进行了功能性的表达，将L．苹果酸转化成L-乳酸，L-苹果酸和L-乳酸含量分别与对照差异极显著和显著，苹果酸的相对降低率平均为20．95％。在有选择压力条件下，重组质粒相对稳定，而在无选择压力条件下，传代培养10d后大约有65％的重组质粒丢失。 |
| 《中国生物工程杂志》 2005,25(12).-50-55 |
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