| 酒酒球菌mleA基因重组表达质粒pYELmleA的构建及其在酿酒酵母中的表达 |
| 刘延琳[1] 蒋思欣[2] 何秀萍[2] 李华[1] 张博润[2] |
| 关键词：重组表达质粒 leA基因 酿酒酵母 构建 球菌 L-苹果酸 乳酸含量 L-乳酸 显著性分析 转化子 重组质粒 调控元件 强启动子 穿梭质粒 大肠杆菌 筛选鉴定 PAGE 目的基因 杂交检测 HPLC MLF 酶基因 终止子 酵母菌 亮氨酸 色氨酸 |
| 主要内容：苹果酸-乳酸酶是进行MLF的功能酶。笔者进行酒酒球菌SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因重组表达质粒的构建。利用来自重组质粒pLmleA的，mleA基因，以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件。以大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒YEp352为载体，构建了重组表达质粒pYELmleA，并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS58。酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定。SDS—PAGE检测表明获得的转化子表达了约60KD的目标蛋白。斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中。获得的转化子在添加了L-苹果酸的培养基中培养4d；取培养液上清用HPLC检测L-苹果酸及L-乳酸含量，采用t检验进行差异显著性分析，结果表明mleA基因进行了功能性的表达，将L-苹果酸转化成L-乳酸，L-苹果酸和L-乳酸含量分别与对照差异极显著和显著，L-乳酸的生成量为1002—1106mg／L。苹果酸的相对降低率为19．16—22．34％。 |
| 《中国农学通报》 2005,21(4).-48-52 |
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