| 酒类酒球菌mleP基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达 |
| 蒋思欣[1] 刘延琳[2] 何秀萍[1] 郭雪娜[1] 张博润[1] |
| 关键词：酒类酒球菌 基因 克隆 酿酒酵母 表达 苹果酸通透酶基因 |
| 主要内容：苹果酸通透酶具有协助苹果酸-乳酸发酵(MLF)的重要功能。以酒类酒球菌(Oenococcus oeni)优良菌系Oenococcus-Lee-SD-2a的总DNA为模板，用PCR方法克隆到苹果酸通透酶基因mleP，构建了重组质粒pBMmleP。序列分析表明克隆到的基因序列与已报道的序列同源性为99％。为使目的基因在酿酒酵母中表达，以大肠杆菌一酿酒酵母穿梭质粒YEp352为载体，以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件，构建了重组表达质粒YEpmleP，并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS58。酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定。获得的转化子在添加了L-苹果酸(5g／L)的培养基中培养4d；取培养液上清用HPLC检测，结果显示重组转化子YSP的培养液中L-苹果酸剩余含量均低于空载体转化子YS352，因此所得酵母重组转化子对苹果酸的转运能力有所提高。 |
| 《微生物学报》 2004,44(4).-465-468 |
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