| PRGDWR—尿激酶原双功能嵌合分子的性质研究 |
| 党昕[1] 杨晶鑫[2] 等 |
| 关键词：PRGDWR片段 尿激酶原 溶栓活性 血小板聚集 双功能嵌合分子 重组 表达 |
| 主要内容：为赋予单链尿激酶型纤溶酶原激活剂（single chain urokinase-type oplasminogen activator,scu-PA,尿激酶原）以抗血小板聚集的功能，在scu-PA的kringle区118位Gly与119位Leu之间插入PRGDWR序列（insert mutant B,InB)利用甲醇酵母（pichia pastoris)进行分泌表达，经金属离子螯合亲和层析与S强阳离子交换层析，得到纯蛋白，实验测定InB对人工合成底物S－2444的酰胺解活性为5900IU/mg，动力学常数为：Km^InB S-2444＝56．8umol.L^-1,kcat^inB,S-2444=0.33s^-1，水解天然底物plasminogen的动力学常数为：Km,plg^InB=0.397umol.L^-1，kcat,plg^InB=0.0164s^-1,InB激活plsaminogen的反应在有fibrin存在条件下InB的活性为无fibrin条件下的46．3％。该突变体在体外激少在plasminogen的活性与同一系统表达的野生型scu-PA基本相同，该突变体表现出较强的抗血小板聚集活性，IC50＝12．7umol.L^-1,而野生型 -PA无此功能，实验表明scu-PA的K区插入突变体InB是一种极具潜力的双功能溶栓分子。 |
| 《生物化学与生物物理进展》 2001,28(2).-203-209 |
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