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抗CD3基因工程嵌合抗体IgG在哺乳动物细胞中的表达和活性测定

邵晓枫徐晨许元富熊冬生刘银星杨纯正生物工程学报.2003,19(5).-527-531

单克隆抗体基因工程抗体嵌合抗体抗CD3抗体

利用基因工程方法将鼠源性抗CD3抗体HIT3a的可变区和人源抗体(IgG)的完整的恒定区连接起来，构建全抗型抗CD3嵌合抗体，该型抗体具有较低的免疫源性可作为免疫抑制剂应用于器官移植，减少受体产生免疫排斥，提高移植器官的存活率。利用PCR方法从抗CD3 ScFv重组噬菌体表达载体pCANTAB 5E上扩增抗CD3抗体的轻链和重链可变区，将轻链和重链可变区组装到含有人抗体(IgG)恒定区的表达载体中，构建抗CD3嵌合抗体IgG的轻链和重链表达载体PKNl00和PGlDl05，并用脂质体法共转染CHO细胞。结果证明，抗CD3嵌合抗体的VL和VH与HIT3a抗体的VL和VH完全相符，ELISA和Western blot检测结果证实转染细胞的培养上清中含有抗CD3嵌合抗体IgG的表达，表达产物能与Jurkat细胞结合，并能竞争性抑制HIT3a抗体和Jurkat细胞结合活性，^3H—TdR掺入实验表明，抗CD3嵌合抗体与亲代抗体HIT3a一样，具有促进外周血单核细胞增殖的作用。我室构建的全抗型抗CD3嵌合抗体分子表达载体可在CHO细胞中稳定表达，表达产物有较好生物活性，具有潜在的临床应用价值。