| 细粒棘球绦虫胰岛素样生长因子1受体蛋白的生物信息学分析及多克隆抗体制备 |
| 夏衣旦木·吐尼牙孜; 廖霞; 李婧; 贾雨桐; 赵金龙; 杜韫; 方梓屹; 林仁勇; 吕国栋 |
| 关键词：细粒棘球绦虫;;胰岛素样生长因子1受体;;生物信息学分析;;多克隆抗体 |
| 主要内容：【目的】对细粒棘球绦虫的胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor 1 receptor of Echinococcus granulosus sensu stricto,EgIGF-1R）蛋白进行生物信息学分析,制备EgIGF-1R的多克隆抗体并定位其在幼虫阶段的表达。【方法】使用Mega 11.0软件对EgIGF-1R（GenBank登录号:XP024354248.1）及其同源基因的氨基酸序列进行ClustalW多重比对,并构建系统进化树。通过生物信息学方法分析EgIGF-1R蛋白的理化特征、跨膜区域、蛋白结构等生物学信息。选择EgIGF-1R的优势肽段免疫新西兰大白兔制备其多克隆抗体,并利用ELISA方法检测抗体效价。通过免疫组织化学、免疫荧光试验定位检测EgIGF-1R在细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡阶段的表达情况。【结果】氨基酸序列比对结果显示,EgIGF-1R与日本血吸虫、智人IGF-1R同源基因氨基酸序列相似性分别为32.02%和31.57%。进化树分析结果显示,EgIGF-1R与多房棘球绦虫、布氏姜片虫及日本血吸虫的亲缘关系较近;与智人、小鼠等物种的亲缘关系较远。生物信息学分析结果显示,EgIGF-1R蛋白含有1 680个氨基酸;EgIGF-1R蛋白分子质量为1.839×10～5 u,等电点为8.59;具有2个跨膜区域,分别位于第1 034-1 056和1 164-1 186位氨基酸,是一种跨膜蛋白;其含有18个酪氨酸磷酸化位点、123个丝氨酸磷酸化位点和60个苏氨酸磷酸化位点。EgIGF-1R蛋白二级结构中α-螺旋、β-折叠、无规则卷曲占比分别为21.19%、16.61%和62.20%;3D结构中N-端和C-端相距较远。EgIGF-1R与人源胰岛素样生长因子1及人源胰岛素的对接分数分别为-1 739.46和-1 099.10 kJ/mol。ELISA结果显示,EgIGF-1R多克隆抗体效价为1∶64 000。免疫组织化学和免疫荧光试验结果显示,EgIGF-1R在原头蚴的顶突、吸盘和被膜表达,在囊泡的生发层表达。【结论】EgIGF-1R蛋白具有结合人源胰岛素生长因子1等细胞因子的结构域,表达于细粒棘球绦虫的原头蚴和囊泡等幼虫阶段,本研究制备的EgIGF-1R多克隆抗体为研究EgIGF-1R在细粒棘球绦虫致病机制中的作用奠定了基础。 |
| 《中国畜牧兽医》 2025,(11):5393-5402 |
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