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表达抗α毒素单链缺本基因工程菌株的构建

赵宝华[1] 许崇波[2] 等微生物学杂志.2002,22(1).-12-14,21

α毒素单链抗体基因表达生物学特性基因工程菌株

将2种抗A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体（ScFv)基因ScFv-2E3和ScFv-1A8分别克隆至表达质粒pUC119,pET-20b,pET-28a和pHOC21中，构建了重组质粒，分别转化至相应的受体菌JM105，BL21（DE3）和XL1-BLUE中，得到表达ScFv的重组菌株，ELISA和SDS-PAGE分析检测表明：经IPTG诱导后所表达的ScFv目的蛋白主要形成了包含体的形式，但也有少量ScFv存在于重组菌株的培养上清和胞周质中，经薄层扫描分析；重组菌株XL1-BLUE（pHOG-2E3)的蛋白表达产物分别占菌体可溶性蛋白的4%，重组菌株XL1-BLUE（pHOG-2E3)的蛋白表达产物占菌体总蛋白的相对含量为22%，其相对分子量约为31ku。表达的ScFv蛋白不但具有中和卵磷脂酶的活性，而且能够对致死性腹腔攻击α毒素的小鼠产生良好的被动保护作用。