| 在大肠杆菌中以融合蛋白高效表达基因工程产品人心钠素 |
| 陈伟京 王俊 等 中国医学科学院学报.2001,23(6).-573-579 |
| 心钠素 大肠杆菌 融合蛋白 凝血酶 基因工程 |
| 目的 构建以融合蛋白形式在大肠杆菌中高效表达心钠素的重组质粒，稳定高效地获得基因工程产品心钠素。方法 采用PCR和亚克隆技术构建带有心钠素的融合基因并在大肠杆菌中高效表达融合蛋白。利用操纵子重复克隆提高表达量，以凝血酶切割融合蛋白释放心钠素小肽并通过柱层析纯化蛋白质。检定产品的各项理化指标和大鼠的体内降压，体内利尿和体外舒张血管等药理活性。结果 构建了4个高效表达和心钠素融合蛋白的质粒，分别含1-4个目的基因串联操纵子；通过温度诱导表达后，该系列表达的目的分别为菌体总蛋白的46%、54.8%、56.1%和60.1%；提取纯化包涵体形式的融合蛋白后，以凝血酶切割释放心钠素，再经纯化分离出心钠素，实验室摇瓶发酵每升培养液可获3mg以上的纯度大于96%的产品，产品具有利尿，降压和舒张血管的药理活性。结论 利用融合基因的克隆与表达成功地研制了人心钠素基因工程产品。 |
微信公众号