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基因工程人β干扰素的原核表达及纯化研究

陈国友蒋应明等中国肿瘤生物治疗杂志.2001,8(2).-130-133

β－干扰素蛋白纯化蛋白表达原核表达基因工程

目的：摸索一种适合于中试生产的点突变重组人β干扰素（^17Ser-IFN-β）发酵与纯化工艺。方法：研究不同培养基和热诱导时间对^17Ser-IFN-β表达的影响；观察pH、蛋白浓度和层析条件对^17Ser-IFN-β纯化的影响。结果：^17Ser-IFN-β工程菌在含甘油、酪蛋白水解物及微量元素的M9培养基中，^17Ser-IFN-β表达量明显增加，灰度扫描显示热诱导4h后的表达量最高。目的的蛋白可达菌体总蛋白的20％以上，^17Ser-IFN-β可以相对特异性地被仲丁醇抽提至有机相中，纯度达80％，经S200凝胶过滤柱层析后纯度达90％，用G25柱转换缓冲液，使缓冲液PH值＞8，同时去除缓冲液中的还原剂DTT，将复性后的样品用C4相柱层析进行精制、最终获得纯度＞98％和比活性＞3×10^7U/mg的^17Ser-IFN-β制品。结论：成功地建立了注射用新型重组人β－干扰的中试生产工艺，为随后进行的临床前研究及临床试验打下基础。