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新型高密度发酵基因工程菌G830

杨运桂龚毅等生物化学与生物物理学报：英文版.2001,33(3).-296-302

高密度发酵透明颤菌血红蛋白苏氨酸操纵子乙酸代谢途径脯氨酰内肽酶基因工程菌

运用PCR方法，从磷酸乙酰转移酶（Pta）－乙酸激酶（Ack)代谢途径缺失菌株E.coliPA1染色体上，扩增出天氨酸激酶－1-高丝氨酸脱氢酶－I（thrA）和高丝氨酸激酶（thrB）基因部分序列，构建了整合型重组质粒pVHb-Kan；应用染色体－质粒同源重组的方法，将透明颤菌血红蛋白（Vitreoscila haemoglobin，VHb)基因整合到大杆菌PA1染色体上的thr操纵子，构建了新型整合工程菌G830。在高密度发酵条件下，G830的细胞呼吸强度、能量代谢、最高菌密度和细胞干重，均明显优于对照菌株PA1和BL21；重组蛋白脯氨酰内肽酶在G830和PA1中获得稳定高表达；重组菌生长状况及发酵指标均与空宿主菌基本一致且表达质粒能维持较好的稳定性。整合型vhb的表达及乙酸代谢途径（Pta-Ack）的缺陷，改善了宿主在贫氧条件下的生长，且促进了重组蛋白的表达。该工程菌具有良好的氧耐受力，且乙酸积累得到大幅度降低，可作为适于高密度发酵的基因工程菌。