| 酶切保护聚合酶链反应检测多环芳烃受体与特异性DNA的结合 |
| 孙晞[1] 李芳[2] 孙纳[2] 王小利[2] 陈启政[2] 严红[2] 徐顺清[2] |
| 关键词：受体 DNA 琼脂糖电泳 特异性 结合物 聚合酶链反应检测 对照组 外切酶 核酸 酶切 |
| 主要内容：目的 建立一种改进的核酸外切酶保护聚合酶链反应(PCR)检测DNA．蛋白质结合物。方法 将1pmol／L至10nmol／L二噁英溶液(TCDD)与100μl含不同浓度多环芳烃受体的SD大鼠肝细胞溶质温育，再与1fmol至100nmol含二噁英反应元件的寡核苷酸探针作用形成复合物，用核酸外切酶Ⅲ和S1核酸酶进行消化后进行PCR，通过琼脂糖电泳检测PCR产物。同时设阴性对照(二甲基甲砜，DMSO)和空白对照。结果在实验组用琼脂糖电泳可以检测到期望大小片段(285bp)的DNA，而对照组均为阴性。在一定范围类TCDD浓度与结合。DNA之间存在剂量．效应关系。检测到的最小受体量为2.5fmol，最小DNA量为2fmol。结论 核酸外切酶保护PCR无放射性污染，灵敏度和特异性高，简便易行，可作为DNA-蛋白质结合物的定性检测方法。 |
| 《中华预防医学杂志.2005,39(2).-103-106》 |
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