| 携带人鞘氨醇激酶及突变体基因重组腺病毒载体的制备及表达 |
| 易军[1] 鲁茁壮[2] 段海峰[2] 王莉[1] 陈光辉[1] 王立生[2] |
| 关键词：腺病毒科 鞘氨醇激酶 突变体 |
| 主要内容：目的制备携带人野生型鞘氨醇激酶基因(SPK^wt)及其突变体(SPK^DN)的腺病毒载体，为研究SPK的生物学功能提供高效基因转移载体。方法将野生型和突变体SPK基因亚克隆至穿梭载体pshuttle-cmv，重组的穿梭质粒经Pme线性化后，电转化E.coli BJ-AD-1感受态，获得带有目的基因的腺病毒重组子质粒；重组子经Pac I线性化后，以脂质体介导转染293包装细胞，获得重组腺病毒载体；分别行PCR鉴定重组腺病毒是否携带目的基因，Western blot鉴定目的基因是否表达，酶活性检测判断野生型基因和突变体基因表达活性。结果重组腺病毒带有目的基因，可以感染内皮细胞并正确表达，酶活性分析表明野生型SPK基因增强SPK活性，突变体SPK基因抑制SPK活性。结论成功构建了携带SPK野生型及其突受体的重组腺病毒，为研究SPK的功能提供了物质基础。 |
| 《解放军医学杂志.2005,30(6).-520-523》 |
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