| Nocardia sp．腈水合酶的纯化过程研究 |
| 刘铭 李春 黄星 王娅娜 曹竹安 |
| 关键词：腈水合酶 离子交换层析 疏水层析 蛋白质纯化 丙烯酰胺 |
| 主要内容：对Nocardia sp.高活力腈水合酶进行了纯化研究。在细胞破碎中，超声时间对腈水合酶比酶活存在一个最优值，超声时间为20.00min时得到的比酶活最高。在离子交换层析过程中，采用DEAE—Sepharose作为层析介质，分别对平衡缓冲液pH、离子强度和线性梯度洗脱体积进行了优化。结果表明，采用pH720、50mmol·L^-1的Na2HPO4- NaH2PO4溶液作为平衡缓冲液，O.00～1.00mol·L^-1的NaCl线性梯度洗脱，洗脱体积为20～25倍柱体积，此条件下腈水合酶的纯化倍数和酶活收率较佳。以Phenyl-Sepharose FF为层析介质研究了疏水层析精制腈水合酶的工艺过程，采用两步层析优化方法纯化出的Nocardia sp.腈水合酶比酶活达到2648.0U·mg^-1，酶活收率为40．84％，用SDS—PAGE检测其纯度为99．00％以上。Nocardia sp．腈水合酶的两个亚基分子量分别为22.90 kDa和27.38 kDa。 |
| 《高校化学工程学报.2004,18(3).-324-328》 |
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