| 基因重组人骨形成蛋白4成熟肽在大肠杆菌中的大规模发酵表达及纯化 |
| 秦云 陈苏民 关路媛 陈南春 赵玮钦 宋庆贺 |
| 关键词：重组人骨形成蛋白4成熟肽 恒溶氧发酵 蛋白质表达 蛋白质纯化 |
| 主要内容：含有编码人骨形成蛋白4成熟肽(Bone morphogenetic protein 4 mature peptide，hBMP-4m)cDNA表达质粒的菌株，经50代传代。质粒不丢失。仍然稳定高表达hBMP-4m。将此菌株导入15L NBS发酵罐中进行恒溶氧高密度发酵、诱导表达，测定发酵菌液OD600值为43．5，离心收集菌体，PAGE电泳结果hBMP-4m占细菌总蛋白量的39％。悬浮所收集的菌体、裂菌，洗涤后的包涵体中hBMP-4m占蛋白量的85％。将少量包涵体用8mol尿素缓冲液溶解分别上SP阳离子和Q阴离子交换柱，用连续盐浓度的洗脱液洗脱蛋白。收集各蛋白峰做蛋白电泳分析，找到洗脱液的最合适盐浓度。然后将全部包涵体用8mol尿素缓冲液溶解，上阳离子交换柱SP柱，以最佳盐浓度洗脱液洗脱，获得纯度为91％的hBMP-4m。再上阴离子交换柱Q柱，最佳盐浓度洗脱液洗脱后，所得hBMP-4m纯度为98％。 |
| 《科学技术与工程》 2005,5(6).-337-341 |
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