| 甲基对硫磷水解酶的重组表达及其纯化和性质研究 |
| 傅国平 崔中利 徐玮 吴旭平 李顺鹏 |
| 关键词：甲基对硫磷水解酶 基因表达 Ni-NTA亲和层析 酶活性 |
| 主要内容：用PCR方法获得甲基对硫磷水解酶编码基因，构建了重组表达质粒pET29a-mpd，将其转化至Escherichia coli BL21(DE3)中，经IPTG诱导表达，得到C-末端含有6个寡聚组氨酸的甲基对硫磷水解酶，用Ni-NTA亲和层析纯化得到具有活性的甲基对硫磷水解酶。测定了环境因素对酶活性的影响及酶动力学参数。甲基对硫磷水解酶水解甲基对硫磷时，最适pH8．6～8．8，最佳反应温度15℃；Mn^2+、Zn^2+、Cu^2+可使酶活性增加15％～20％，Ca^2+、Mg^2+微弱地促进酶的作用，Ni^2+对酶活性几乎无影响；1rmmol／L EDTA·Na^2+几乎不影响酶的活性，而10mmol／L EDTA·Na^2+对甲基对硫磷水解酶有较强的抑制作用。甲基对硫磷水解酶水解乙基对硫磷时，最适pH8．6。25℃时，该酶对甲基对硫磷的米氏常数Km为(68．6±5．1)μmol／L，kcat为(45±6)s^-1；对乙基对硫磷的米氏常数Km为(59．5±6．0)μmol／L，kcat为(8±1)s^-1。kcat／Km表明甲基对硫磷水解酶对甲基对硫磷的催化效率更高。 |
| 《微生物学报.2004,44(3).-356-360》 |
| 全文下载请进入http://hightech.stlib.cn/tpi_1/sysasp/include/index.asp |
微信公众号