| 流动相组成、浓度和pH对蛋白质在金属螯合柱上的保留特性的影响 |
| 李蓉 邸泽梅 等 |
| 关键词：金属螯合色谱 保留特性 竞争洗脱 蛋白质 分离 金属螯合柱 色谱保留特性 竞争洗脱剂 流动相 组成 浓度 pH值 |
| 主要内容：系统研究了流动相中盐的性质和浓度、溶液pH以及竞争配体对蛋白质在金属螯合色谱中保留值的影响。导出了描述蛋白质在金属螯合色谱中保留特征的数学表达式，提出用洗脱强度指数ε表征盐溶液的洗脱能力。根据不同色谱条件下蛋白质的保留特性，发现蛋白质在金属螯合色谱中的保留是配位、静电和疏水的协同作用，对与蛋白质强结合的金属螯合柱，以配位作用为主，静电作用为辅；对弱结合的金属柱，以静电作用为主，配位作用为辅。在流动相中加入高浓度非成络盐，可增强蛋白质和固定相间的疏水作用，利用金属螯合配体和蛋白质间的作用力与色谱条件的相关性，对不同类型金属螯合柱可选择不同的洗脱方式，对弱结合的金属螯合柱可用低浓度盐或pH梯度洗脱，对强结合的金属螯合柱通常用竞争洗脱剂洗脱。实验证明，NH3是一种优秀的竞争洗脱剂，它不仅效能高，而且价廉，固定金属流失少，浓度易控制。改变色谱条件可改变金属螯合配体和蛋白质间的作用力，提高金属螯合色谱的选择性。 |
| 《色谱》 2001,19(5).-385-389 |
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