| D-氨基酸氧化酶在不同毕赤酵母宿主菌中的表达比较 |
| 冯美卿[1] 黄海[1] 史训龙[1] 余志良[2] 袁中一[2] 周珮[1] |
| 关键词：D-氨基酸氧化酶 甲醇酵母 不同宿主菌 表达比较 DL-苯丙氨酸 拆分 |
| 主要内容：D-氨基酸氧化酶(DAAO)在转化头孢菌素C生产7-ACA和转化DL-氨基酸制备α-酮酸和L-氨基酸上起着重要的作用。采用DNA操作技术，将来源于三角酵母的DAAO基因连接至表达载体pPIC3．5K上，再将表达质粒pPIC3．5K-DAAO分别整合P．pastoris的宿主细胞KM71和GS115，经筛选获得阳性重组菌PDK13(Mut^s)和PD27(Mut^*)。重点对两种突变菌的表达条件进行了比较。结果显示：PDK13(Mut^s)株比PD27(Mut^*)株消耗甲醇慢、诱导时间长，但对通气量要求低、表达水平高，摇瓶活力分别达到2700和2500IU／L，14L发酵罐内活力分别达到10140和8463IU／L。初步探索了DAAO对DL-苯丙氨酸的拆分，结果显示基因工程菌表达的DAAO具有良好的转化DL-苯丙氨酸制备苯丙酮酸和L-苯丙氨酸的能力。 |
| 《生物工程学报.2004,20(4).-572-577》 |
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