| 抗凝活性肽RGD226基因构建、表达、产物纯化及活性分析 |
| 杨兴文[1] 刘俭[2] 等 |
| 关键词：抗凝活性肽RGD226 基因构建 表达 产物纯化 活性分析 突变胰岛素蛋白质骨架 RGD肽 血小板聚集抑制 抗凝 |
| 主要内容：通过PCR法，将来源于蛇毒蛋白质eristostatin中的一段含有RGD（Arg-Gly-Asp)序列的十三肽（SRVARGDWNDDYS）的基因，以一个无胰岛素活性但保留天然免疫原性的胰岛素原突变体（PJG401）基因为模板，置换其B28和A1位之间的连接肽基因，构建成了能展示RGD功能序列的人源化分子（RGD226）的基因，通过该基因在大肠杆菌中的表达，产物分离纯化，得到高纯度RGD226。该RGD肽对由ADP诱导的体外人血小板聚集的半抑制浓度IC50为22.3μmol/L。其胰岛素免疫活性的PJG401的15．1％，提示其在一定程度上保留了胰岛素原的免疫原性，其受体结合活性不到PJG401的0．1％，说明其胰岛素的生物活性基本丧失。动物实验证实，RGD226在延长小鼠出血时间上具有较明显的作用。 |
| 《中国生物化学与分子生物学报》 2002,18(5).-583-587 |
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