| 人骨桥蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达 |
| 王雪[1] 桂淑玉[2] 等 |
| 关键词：大肠杆菌 表达 聚合酶链反应 基因表达 骨桥蛋白 |
| 主要内容：目的 构建人骨桥蛋白（hOPN)表达载体，体外表达及表达产物的纯化。方法 培养人脐静脉内皮细胞，提取总RNA，反转录合成cDNA第一链，以此cDNA为模板经PCR合成插入片段，连接至载体pGEX-6P－1，转化到XL1－blue中进行诱导表达。表达产物经SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳后，切下目的蛋白进行洗脱纯化。结果 构建的表达载体经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA测序，证明所构建的质粒是pGEX-6P-OPN。SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳发现该重组质粒经IPTG诱导后表达一种新的蛋白（表达量为16.7%)，这种蛋白不存在于诱导后的pGEX-6P-1表达产物中，纯化后蛋白纯度为99％。结论 成功构建了hOPN表达载体，并进行体外表达。 |
| 《安徽医科大学学报》 2002,37(6).-419-422 |
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