| huIL—6—GM—CSF（9—127）融合蛋白的表达及活性测定 |
| 孙强明 戴长柏 等 |
| 关键词：GM－CSF 融合蛋白 基因表达 基因克隆 白细胞介素－6 生物活性蛋白 |
| 主要内容：目的 构建及表达具有huIL-6和huGM-CSF双重生物学活性的huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白分子。方法 应用PCR技术对huIL-6和huGM-CSF的基因分别加以改造，同时在二者之间加上连接肽序列（G-G-S-G-S）3，克隆PCR产物，并构建成pBU220-IL-6-GM-CSF(9-127)表达质粒，将表达质粒导入E.coliDH5α中，诱导表达融合蛋白，通过QSepharoseH.P。离子交换柱和SephacrylS-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白，使用MTT法测量其huIL-6和huGMp-CSF生物学活性。结果 pUC18-IL-6-GM-CSF(9-127)的序列与理论设计完全一致，表达质粒在E.coliDH5α中得到高效表达，表达的融合蛋白占总蛋白含量的30%以上，表达产物以包涵体的形式存在，通过QSepharoseH.P，离子交换柱和SephacrylS-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白，其纯度达到96A%以上，融合蛋白具有huIL-6和huGM-CSF的双重生物学活性，其促进huIL-6依赖细胞株B9和huGM-CSF依赖细胞株TF-1增殖的比活性分别为2.86×10^7U/mg和3.33×10^8U/mg。结论 获得了具有较高纯度和双重生物学活性的huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白。 |
| 《免疫学杂志》 2002,18(4).-253-257 |
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