| 胰岛素原C肽多聚体基因在大肠杆菌中的表达及重组C肽在水溶液中的稳定性 |
| 李素霞[1] 田丽萍[2] 刘海峰[1] 张育坚[2] 胡晓波[2] 龚毅[2] 袁勤生[1] |
| 关键词：胰岛素原C肽 RP-HPLC 多聚体基因 大肠杆菌 表达 水溶液 |
| 主要内容：合成了胰岛素原C肽三聚体的基因，并在大肠杆菌中得到高效表达。表达的融合蛋白质通过设计的特异性位点的酶切得到重组的人胰岛素原C肽单体。融合蛋白质以可溶性蛋白质的形式表达，表达量约为80mg／L。Ni—NTA亲和柱可有效地从细胞裂解的上清液中分离纯化融合蛋白质，得到纯度大于70％的融合蛋白质37．5mg／L。融合蛋白质可经胰蛋白酶/羧肽酶B双酶切有效释放天然的C肽。释放的C肽经氨基酸组成分析、与标准对照的RP—HPLC分析和免疫发光法定量证实与天然人C肽完全相同。C肽经RP-HPLC纯化后可得，总的收率为1．5mg/L，纯度大于95％。考察了C肽在冻干过程中及在水溶液中的稳定性。结果表明C肽在冻干过程中稳定，在水溶液中其稳定性受pH和温度的影响。在pH3和pH7．4缓冲液中，37℃或70℃下，C肽的降解符合一级动力学。C肽冻干品直接溶解于pH9的缓冲液中，立即降解，降解产物在37℃和70℃下基本稳定。C肽冻干品直接溶解于pH3的缓冲液中，立即发生降解反应，随后可观察到随温度升高和时间延长，降解反应的进行，37℃、10h，可观察到约80．3％的C肽保持，而在70℃、10h，只有43％C肽保持。C肽在pH7．4最稳定，37℃、6h或10g／L BSA存在下，70℃、3h，未观察到降解产物。PH7．4、37℃、10h，在有和没有10g／L BSA存在的情况下，C肽的保持率分别为99％和96％，从而显示了BSA的保护作用。 |
| 《生物化学与生物物理学报：英文版》 2003,35(11).-986-992 |
| 全文下载请进入http://hightech.stlib.cn/tpi_1/sysasp/include/index.asp |
微信公众号