| 基于荧光光谱及高活性固定方法的蛋白质芯片研究 |
| 廖玮 赵新生 |
| 关键词：蛋白质芯片 荧光光谱 高活性固定方法 制备 |
| 主要内容：随着后基因组时代的来临，蛋白质芯片——作为高通量蛋白检测和筛选的重要手段——的研究变得越来越重要。蛋白分子在固体表面的固定，一直是蛋白质芯片研究的核心问题之一。影响蛋白质分子在固体表面性质及行为的因素主要有：疏水相互作用，静电相互作用，表面微环境。我们通过表面荧光光谱表征了Si-OOOH和Si-ssDNA表面固定蛋白的情况。为考察Si-COOH和Si-ssDNA在固定蛋白效率上的差异，另一方面为了解蛋白质在表面的物理吸附程度，分别将Si-COOH和Si-ssDNA浸泡于含有和没含有活化剂的蛋白质溶液中进行固定反应，然后清洗检测荧光。结果如图1所示，活化后固定在Si-ssDNA表面的蛋白比Si-COOH表面固定的稍多，而物理吸附的量在两种表面却有较大的差别。Si-ssDNA表面吸附的蛋白却明显少于Si-COOH表面吸附的蛋白数量。为了考察不同方法固定蛋白在表面上活性差异，我们先在Si-COOH和Si-ssDNA表面固定rIgG，然后分别与不同浓度的FTTC-GAR IgG反应，清洗后检测荧光。得到的数据用Langmuir吸附等温式进行拟合，得到平衡常数分别是：K(Si-COOH)=1．97±0．04×10^6M^-1，K(Si-ssDNA)=3．20±0．01×10^6M^-1。有特异性识别和无特异相互作用的蛋白对之间的信号比较，也是衡量表面蛋白活性和生物传感器优劣的一个重要标准。我们选取了血浆中含量最大的三种蛋白作为测试模型分子，即兔IgG(rabbit—IgG)，牛血清白蛋白(BSA)，纤维蛋白原(Fibrinogen)。将这三种分子分别固定在Si-COOH和Si-ssDNA表面，最后与含有活化剂的FTTC-羊抗兔IgG溶液反应，清洗后检测荧光。得到了如图3所示的结果。无论是Si-COOH还是Si-ssDNA表面，特异识别的分子对兔IgG和FTTC-羊抗兔IgG信号都远大于其他两种无特异相互作用的蛋白质分子对。以上实验可以证明Si-COOH和Si-ssDNA都可以用来进行高活性蛋白质芯片的制备。 |
| 《光谱仪器与分析》 2003(1).-45-45 |
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