| 人蛋白C cDNA突变体的设计、克隆与序列分析 |
| 贾莉玮 吕茂民 徐斯日古愣 沈永才 赵保全 章金刚 |
| 关键词：人蛋白C cDNA 突变体 设计 克隆 序列分析 定点突变 |
| 主要内容：目的 通过对人蛋白C cDNA的定点突变，构建人蛋白C突变体cDNA，以期实现从哺乳动物细胞中直接表达出具有生物活性的人蛋白C产物。方法 针对人蛋白C cDNA序列设计引物以引入突变序列，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和重组PCR方法，从人胎肝总RNA中分别钓取人蛋白C的重链和轻链，经重组PCR反应将两者连接，然后将其克隆入pGEM-T载体中，经酶切和PCR鉴定后进行测序。结果 经RT-PCR和重组PCR扩增获得大小为1374bp的cDNA片段，并成功构建了人蛋白C cDNA突变体的克隆质粒pCEM-T／mhPC，序列分析证实所引入的编码8个氨基酸短肽的核苷酸序列突变位点正确取代了人蛋白C的活性肽，获得人蛋白C突变体cDNA的克隆。结论 已成功进行了人蛋白C cDNA的突变，获得了人蛋白C cDNA突变体的克隆，为进一步进行人蛋白C突变体cDNA的表扶和活件鉴定奠定了基础。 |
| 《中国生物制品学杂志》 2003,16(5).-257-260 |
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