| 人GST—AWP1融合蛋白的原核表达及其抗体制备 |
| 莫永炎 刘亚伟 王静珍 邓鹏 秦清和 杨志刚 姜勇 |
| 关键词：信号传导分子 蛋白激酶C相关激酶1相关蛋白 原核表达 制备 GST－AWP1融合蛋白 多克隆抗体 |
| 主要内容：为进一步研究人的一新蛋白——蛋白激酶C相关激酶1相关蛋白(AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST-AWP1融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备．采用逆转录PCR（RT-PCR)法从人ECV304内皮细胞中扩增AWP1 cDNA编码区，并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶(GST)融合蛋白表达质粒pGEX—KG中．经酶切、序列鉴定分析后，用该重组质粒转化大肠杆菌BL21，并经异丙基β-D-硫代半乳糖苷(OPTG)诱导产生GST-AWP1融合蛋白，继而纯化获得了分子量约56kD的融合蛋白．将此融合蛋白免疫新西兰兔，经ELISA和Western印迹检测获得了效价高、免疫活性强的免抗人多克隆抗体．结果表明成功构建了GST-AWP1融合蛋白表达载体，在大肠杆菌高效表达了GST-AWP1融合蛋白，并获得高效多抗，为下阶段深入AWP1功能研究提供了重要的基础。 |
| 《中国生物化学与分子生物学报》 2003,19(2).-168-172 |
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