| 来源于Escherichia coli的高比活植酸酶基因的高效表达 |
| 罗会颖[1] 姚斌[1] 袁铁铮[1] 王亚茹[1] 史秀云[1] 伍宁丰[2] 范云六[2] |
| 关键词：高比活植酸酶 基因改造 毕赤酵母 基因表达 |
| 主要内容：高效表达高比活植酸酶是进一步提高植酸酶发酵效价、降低植酸酶生产成本的一个有效途径。对源于Escherichia coli的高比活植酸酶基因appA，按照毕赤酵母(Pichia pastorts)密码子的偏爱进行了密码子优化改造。该改造后的基因appA-m按正确的阅读框架融合到毕赤酵母表达载体pPIC9上的α-因子信号肽编码序列3’端，通过电击转化得到重组转化子。对重组毕赤酵母的Southern blotting分析证实植酸酶基因已整合到酵母基因组中，并确定了整合基因的拷贝数。Northern blotting分析证实植酸酶基因得到了正常转录。SDS-PAGE分析和表达产物的研究表明，植酸酶得到了高效分泌表达，在5L发酵罐中植酸酶蛋白表达量达到2．5mg／mL发酵液，酶活性(发酵效价)达到7．5×10^6IU／mL发酵液以上，大大高于目前报道的各种植酸酶基因工程菌株的发酵效价。 |
| 《生物工程学报.2004,20(1).-78-84》 |
| 全文下载请进入http://hightech.stlib.cn/tpi_1/sysasp/include/index.asp |
微信公众号