| 重组人核苷二磷酸激酶A的理化性质 |
| 熊盛[1] 钱垂文[1] 黄立[1] 王一飞[1] 张美英[1] 李久香[1] 严玖凤[2] 王小宁[2] 张晓伟[2] 毕志刚[2] |
| 关键词：人核苷二磷酸激酶A 飞行质谱 多角度激光散射 表观分子量 六聚体 |
| 主要内容：对重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK-A)进行纯化，并对重组产物的理化性质及在溶液中的聚合状态进行鉴定。NDPK-A工程菌发酵后的菌体高压匀浆，然后微孔过滤、超滤浓缩，所得样品经DEAE阴离子交换、Cibacron Blue亲和层析、分子筛层析三步纯化后，以SDS-PAGE和RP-HPLC分析纯化产物的纯度，RP-HPLC测定酶活性。合格制品以基质辅助激光解析飞行时间质谱测定相对分子质量(MW)；Edman降解法测定N末端序列；多角度激光散射法测定重组产物在溶液中的表观分子量。结果表明，rhNDPK-A纯化产物的SDS-PAGE纯度为97．3％，RP-HPLC纯度为99．2％；比活性为(900±100)u／mg；单体相对分子质量为17017，与NDPK-A分子量理论值相差132。测序结果表明，rhNDPK-AN末端缺失Met残基，其理论分子量为17017，与飞行质谱测定结果完全一致。表观分子量测定结果表明，rhNDPK-A在溶液中形成六聚体，表观分子量为102kD。上述结果说明，NDPK-A重组产物具与天然产物相同的自发形成六聚体性质，这为NDPK-A新药开发和机理研究打下了良好基础。 |
| 《生物工程学报.2004,20(1).-85-89》 |
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