| 大肠杆菌亮氨酰—tRNA合成酶与tRNA^Lcu的相互作用头孢菌素酰化酶的表达、翻译后加工和亚基重组 |
| 李勇 王恩多 |
| 关键词：大肠杆菌 tRNA^Leu 亮氨酰－tRNA合成酶 相互作用 头孢菌素酰化酶 亚基重组 基因表达 基因克隆 |
| 主要内容：第一部分：为得到大量的大肠杆菌tRNA1^Leu和tRNA2^Leu，研究tRNA与亮氨酰－tRNA合成酶（LeuRS)的相互作用，用基因克隆的方法高表达并纯化了它们；测定了接受活力和被LeuRS催化的动力学常数；改进了RNA体外转录必需的T7RNA聚合酶的纯化方法，优化了转录条件，转录序列比文献值高10倍。用体外转录方法得到了各种在接受茎突变的tRNALeu变种，研究了一个在CP1结构域插入40个氨基酸残基的变种LeuRS-A对tRNA^Leu2种等受体的识别，证明了tRNA1^Leu和tRNA2^Leu接受茎上的第一对硷基对是否摆动是LeuRS-A识别的关键。第二部分：大肠杆菌中高表达头孢菌素酰化酶基因10倍以上。研究了它的α-亚基的N－端变化（LAEP…→MGIP…）对酶学动力学常数的影响。构建了带有不同抗菌素抗性和启动子的高表达质粒，研究了它们表达的特点，分析了这些质粒的不同作用，用含有编码该酶两个亚基的基因的相容质粒共转化的方法。研究了它们在体内的重组和前体的加工。研究结果表明，该酶可能属于一类新的N－端亲和水解的酰化酶。 |
| 《中国科学院研究生院学报.2003,20(1).-117-122》 |
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