| 大肠杆菌碱性磷酸酶的体外定向进化研究 |
| 徐卉芳[1] 张先恩[2] 张治平[2] 张用梅[2] |
| 关键词：大肠杆菌 碱性磷酸酶 体外定向进化 催化活力 |
| 主要内容：大肠杆菌碱性磷酸酶(E．coli alkaline phosphatase,EAP,EC3．1．3．1)是一个非特异性二聚体磷酸单酯酶．采用易错聚合酶链反应(e.pdfor prone PCR)的方法，在原有高活力突变株的基础上，对EAP远离活性中心催化三联体的区域进行定向进化，经两轮e.pdfor prone PCR，获得催化活力较亲本D101S突变株提高3倍、较野生型酶提高35倍的进化酶4—186，并对该酶的催化动力学特征进行了分析．进化酶基因的DNA测序表明4—186含两个有义氨基酸置换：K167R和S374C，二者既不位于底物结合位点，也不位于酶的金属离子结合位点． |
| 《生物化学与生物物理进展.2003,30(1).-89-94》 |
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