| 酪氨酸羟化酶重组质粒标准品构建 |
| 刘燕[1] 彭聿平[2] 黄彦[2] 黄慧伟[2] 邱一华[2] 交通医学 2010,24(5).-463-465 |
| 酪氨酸羟化酶 pGEM-T载体 T-A克隆法 实时定量聚合酶链反应 |
| 目的：用T-A克隆法构建含酪氨酸羟化酶（TH）基因的重组质粒,并用实时定量PCR（RQPCR）方法制备标准品。方法：提取小鼠肾上腺髓质组织总RNA,逆转录为cDNA后进行RT-PCR,回收纯化电泳胶,T-A克隆与pGEM-T载体连接,转化Top-10感受态细菌,蓝白斑筛选出阳性菌落后,大量提取质粒,再进行RQPCR反应,最后制得含TH的重组质粒标准品。结果：肾上腺髓质TH的表达,PCR扩增,菌液PCR,测序鉴定均证实TH重组到pGEM-T载体上,经RQPCR定量后得到TH重组质粒标准品的标准曲线。结论：该方法能大量制备TH质粒标准品,并且可推广应用。 |
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