| R-工程菌表达产物酯酶B1的纯化及其特性 |
| 孙中涛 闫艳春 姚良同 田林茂 |
| 关键词：酶工程 酯酶B1 分离 纯化 酶学特性 半衰期 R-工程菌 农药残留 生物降解 |
| 主要内容：为将酯酶B1应用于果蔬农药残留的降解，对其进行分离纯化，并对其酶学特性进行研究。R-工程菌在LB液体培养基中37℃震荡培养14h，细胞经石英砂冰浴研磨破壁，粗提酶液经硫酸铵分级盐析、SephadexG-50分子筛柱层析脱盐、DEAE—Sepharose Fast Flow离子交换层析、SephadexG-75分子筛柱层析得到凝胶电泳均一的酯酶B1。SDS-PAGE结果表明，该酶分子量为67kDa。酯酶B1的纯化倍数为43．4，收率为2．94％。该酶的最佳作用条件是37℃、pH-7．0，常温(25℃)下，酯酶B1的半衰期为62h，42℃时该酶仍然十分稳定。酶促反应动力学曲线采用双倒数法，37℃时最大酶促反应速度Vm=0．73mg／(mL·min)，米氏常数Km=3．89mg／mL。酯酶B1活力强、在常温下反应速度快、稳定高，说明其用于果蔬农残降解在技术上是可行的。本文将酯酶B1纯化至电泳纯，因而工艺复杂、收率较低，但在实际应用中，只需进行粗分离，工艺简单，收率高达70％，因此，该酶的开发应用在经济上也是可行的。 |
| 《安全与环境学报.2003,3(6).-31-35》 |
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