| 非天然D—型氨基酸生物转化中酶的纯化及其基因序列 |
| 袁静明 封霞 等 |
| 关键词：非天然D－型氨基酸 生物转化 菌株No.2262 海因酶 N－氨甲酰基－D－氨基酸酰氨水解酶 纯化 基因序列 重组酶 |
| 主要内容：D－海因酶（D－Hydantoinase,HDTase）和N－氨甲酰基－D－氨基酸酰胺水解酶（D－Carbamoylase,DCase）是医药和食品工业上用于生物转化D－型氨基酸的酶。为了用人工酶替代现用的天然酶转化工艺，我们用热变性、硫酸铵分级及Q－Sepharose、Phenyl-Sepharose、Superose12等多步柱层析，从现用菌株No．2262中化了HDTase和DCase，二酶均达到SDS－PAGE纯，经N－端序列分析，HDTase和DCase的N－末端氨基酸序列分别为：MDKLIKNGTI和MTKRQKILAF。首先，根据酶的N－末端氨基酸顺序推论并合成了正多核苷酸简并引物，然后按蛋白质数据库资料，在比较不同菌株氨基酸残基同源性基础上，化学合成了数对反向多核苷酸引物，以菌株No．2262基因组DNA为模板，经PCR扩增获得了HDTase的部分基因序列（－700bp）和DCase的全部基因序列（912bp），为使人工酶用于非天然D－型氨基酸的生物转化奠定了基础。 |
| 《山西大学学报：自然科学版.2002,25(2).-156-162》 |
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