| 重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a的制备及其在tPA突变体纯化中的应用 |
| 王新 屈贤铭 等 |
| 关键词：重组刺桐胰蛋白酶 抑制剂a 制备 tPA突变体 纯化 应用 高效表达 亲和层析 |
| 主要内容：将基因工程菌株E.coliBL21(DE3)pET22b-mETIa高密度发酵，用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导，重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa)蛋白在E.coli中得到较高水平表达，表达量占菌体总蛋白的40%以上，经菌体破碎，包涵体变性，复性，二步柱层析纯化得到电泳纯的rETIa蛋白，测得rETIa对t-PA突变体（NTA）的抑制平衡常数Ki为8.72±10^-8mol/L，据此利用纯化的rETIa蛋白制备rETIa-Sepharose4B亲和层析柱，直接一步纯化NTA复性液，纯化的NTA纯度达90%以上，收率为96.2%。纯化倍数为13.2，比活为（565.7±71.3)U/μg。 |
| 《生物化学与生物物理进展》 2002,29(3).-420-423 |
| 全文下载请进入http://hightech.stlib.cn/tpi_1/sysasp/include/index.asp |
微信公众号