| 棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 |
| 常团结 陈蕾 等 |
| 关键词：棉铃虫 幼虫 中肠 类胰蛋白酶 基因表达 酶活性 基因克隆 |
| 主要内容：根据昆虫类胰蛋白酶序列的保守性设计了一对引物，以棉铃虫（Helicoverpa armigera)幼虫中肠总RNA反转录出cDNA第一链作为模板，利用RT－PCR，分离出了一种棉铃虫类胰蛋白酶（HaT)基因的cDNA序列。分析表明该cDNA序列的开放阅读框为696bp，编码一个由231个氨基酸残基组成的多肽，推测的氨基酸序列具有His57,Asp102,Ser192组成的电荷中继网，决定胰蛋白酶底物专一性的Asp189，底物结合部位的Gly216和Gly226残基，及其它胰蛋白酶结构上的保守区域。氨基酸序列同源性比较表明：HaT同其它鳞翅目昆虫类胰蛋白酶有较高的同源性，同源性在44％－79％之间。为研究棉铃虫类胰蛋白酶基因（hat)编码产物的活性，将其插入原核表达载体pGEX4T-3和pET23b中，并在大肠杆菌中进行了诱导表达，结果表明，GST－HaT融合蛋白在大肠杆菌中进行了特异表达，非融合形式的表达产物HaT具有胰蛋白酶催化活性。 |
| 《动物学报》 2002,48(6).-790-796 |
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