| 启动子CMV和EF1α对人胰岛素基因在BHK细胞中表达的影响 |
| 李华[1] 刘维全[2] 王萍[3] 王吉贵[4] 董婉维[1] 王禄增[1] 齐顺章[4] |
| 关键词：启动区 遗传学 人胰岛素基因 BHK细胞 表达 |
| 主要内容：目的 构建人胰岛素基因真核高效表达载体，为胰岛素转基因研究奠定基础。方法 用限制性内切酶SpeI和HindⅢ消化pEF1α-GFP，回收1．2kb EF1α启动子，插入到pCMV—mINS的NruI和HindⅢ位点中，获得重组质粒pEF1α—mINS；将pCMV-mINS和pEF1α—mINS分别转染BHK细胞，用G418筛选，阳性克隆传至20代后，分别用放免方法和免疫组化法分析胰岛素和，或胰岛素原在BHK细胞中的表达情况。结果 经放免测定，pCMV—mINS和pEF1α—mINS在BHK细胞中胰岛素和，或胰岛素原的表达量分别为4．077μIU／ml和6．897μIU／ml。经免疫组化分析，pCMV-mINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为190．0±19．56；pEF1α—mINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为181．4±18．45，在BHK细胞核中表达水平的灰度值为155．4±11．66。结论 在BHK细胞中启动子EF1α启动胰岛素基因表达的活性比启动子CMV高。 |
| 《中国实验动物学报》 2003,11(1).-18-22 |
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