| 胰岛素样生长因子1（IGF—1）mRNA同源模板竞争性PCR定量方法的建立 |
| 梁东春 郭刚 等 |
| 关键词：胰岛素样生长因子1 竞争性PCR mRNA |
| 主要内容：胰岛素样生长因子1（IGF－1）是一种多功能的细胞增殖调控因子，其表达水平受多种因素的影响，为了研究IGF－1基因在转录水平上的调控机制，建立了定量测定IGF－1 mRNA的竞争性PCR方法。同时，也建立了一个简便的制备同源性竞争模板的方法，以构了的生组pUC-IGF-1质粒为基础，利用IGF－1 mRNA序列上唯一存在,但是在pUC18质粒上多拷贝的Msp I酶切位点，以该限制性内切酶处理重组pUC-IGF-1质粒。在T4 DNA连接酶作用下对酶产物进行随机连接，以连续产物作为模板，用可扩增IGF－1 cDNA的引物进行PCR，由此得到因含有随机插入序列而与原IGF－1 cDNA产生明显长度差别的重组IGF－1。以不同浓度的该DNA片段作为同源竞争模板与大鼠肝组织cDNA在同一反应体系中进行PCR，对PCR产物进行分析，计算出榇一中IGF－1 cDNA的初始浓度。成功地建立了IGF－1 mRNA的竞争性PCR定量检测方法，为研究IGF－1基因的表达调控奠定了基础，同时也对已克隆的基因进行mRNA定量测定提供了一种简便和灵敏的手段。 |
| 《中国生物化学与分子生物学报》 2003,19(1).-123-126 |
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