| 人胰岛素原DNA疫苗的构建与鉴定 |
| 蒋铁建 周智广 等 |
| 关键词：DNA疫苗 分子克隆 胰岛素原 1型糖尿病 |
| 主要内容：构建1型糖尿病关键自身抗原胰岛素原（Proinsulin）的DNA疫苗，并在体外对其表达产物进行鉴定。从人胰腺cDNA文库用半巢式PCR扩增出编码Proinsulin的cDNA，克隆入载体PGEM－T中，再将其亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1（＋）中，构建重组载体pcDNA3.1(+)／Proinsulin，测序后在真核细胞COS－7中进行体外短暂表达，Western印迹法对其表达产物进行鉴定。结果克隆的人Proinsulin基因，测序表明其cDNA序列与Genbank公布的序列基本相同，仅在第63位氨基酸（C肽区）有一CAG（Glu)→CGG（Arg）的突变，Western免疫印迹法证实DNA疫苗在COS－7细胞中有效地获得了表达。结果说明运用基因克隆方法构建的Proinsulin DNA疫苗，在真核细胞内能有效地表达Proinsulin重组抗原。该疫苗的构建成功，为1型糖尿病的免疫干预提供了实验基础。 |
| 《科学技术与工程》 2003(2).-139-142 |
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